GADD 34 Double Nickase Plasmid (h): sc-400595-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GADD 34 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GADD 34 Double-Nickase-Plasmid (h) und GADD 34 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PPP1R15A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GADD 34: sc-373815
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GADD 34 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400595-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GADD 34 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400595-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1R15A kodiert GADD34, eine induzierbare regulatorische Untereinheit der Proteinphosphatase 1, die die Dephosphorylierung von eIF2α fördert, um die integrierte Stressantwort zu beenden und nach zellulärem Stress die Translation wiederherzustellen. GADD34 wird nachgeschaltet von Signalen des ER-Stresses und der DNA-Schadensantwort hochreguliert und beeinflusst die Proteostase, die Anfälligkeit für Apoptose sowie die Rückkopplungskontrolle der Unfolded-Protein-Response. Über die Steuerung der Dynamik der eIF2α-Phosphorylierung beeinflusst PPP1R15A ATF4/CHOP-assoziierte Transkriptionsprogramme und eine stressadaptive Umgestaltung der Genexpression. Eine Fehlregulation dieser Achse wurde mit pathologischen Zuständen in Verbindung gebracht, die durch chronischen ER-Stress und eine veränderte Stresstoleranz gekennzeichnet sind, was ihre Untersuchung in der Neurodegeneration, bei metabolischem Stress und in der Krebszellbiologie unterstützt.
GADD 34 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PPP1R15A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PPP1R15A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PPP1R15A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PPP1R15A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.