G3BP1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400745-LAC

G3BP1 (Ras-GTPase-aktivierendes Protein-bindendes Protein 1) ist ein RNA-bindendes Protein, das als zentraler Nukleator zytoplasmatischer Stressgranula fungiert und während zellulären Stresses mRNA-Triage, Translationsrepression und RNA-Stabilität koordiniert. Über seine RRM- und RGG-Domänen verknüpft G3BP1 Signalwege mit dem RNA-Stoffwechsel, indem es an Pfade gekoppelt ist, die mit antiviralen angeborenen Immunantworten, MAPK/ERK-Signalisierung und RNP-Remodelling zusammenhängen. Zudem ist es über die Regulation des Transkript-Schicksals und Protein-Protein-Interaktionsnetzwerke, die Entscheidungen zum Zellüberleben prägen, in Programme der DNA-Schädigung und des Replikationsstresses eingebunden. Eine dysregulierte G3BP1-Aktivität wurde mit aberranter Stressgranula-Dynamik und veränderten RNA-Regulationsschaltkreisen in Verbindung gebracht, wie sie in der Krebsbiologie, bei Neurodegeneration sowie in Virus–Wirt-Interaktionen beobachtet werden, was G3BP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien stressadaptiver Phänotypen macht.

G3BP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente G3BP1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

G3BP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der G3BP1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen G3BP1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen G3BP1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.