FXR/NR1H4 Double Nickase Plasmid (h): sc-417410-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FXR/NR1H4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FXR/NR1H4 Double-Nickase-Plasmid (h) und FXR/NR1H4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NR1H4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FXR/NR1H4: sc-25309
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FXR/NR1H4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417410-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FXR/NR1H4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417410-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR1H4 kodiert den Farnesoid-X-Rezeptor (FXR), einen durch Gallensäuren aktivierten nukleären Rezeptor, der als ligandenabhängiger Transkriptionsfaktor die Synthese, den Transport und die Entgiftung von Gallensäuren steuert. In Hepatozyten und Enterozyten koordiniert FXR Stoffwechsel- und Entzündungsprogramme über Signalwege wie die FXR–SHP-vermittelte Regulation von CYP7A1, die Induktion von Transportern für den Export und die Aufnahme von Gallensalzen sowie das Zusammenspiel mit der FGF19/FGF15-Signalgebung. Durch die Verknüpfung der Gallensäurehomöostase mit dem Lipid- und Glukosestoffwechsel beeinflusst FXR zelluläre Stressantworten, Barrierefunktionen und die Immunmodulation in der Darm–Leber-Achse. Eine dysregulierte FXR-Signalgebung ist mit cholestatischen und metabolischen Leberphänotypen assoziiert und wird u. a. im Kontext von Steatohepatitis, Fibroseprogression und der Biologie hepato-biliärer Tumoren untersucht.
FXR/NR1H4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NR1H4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NR1H4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NR1H4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NR1H4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.