Plasmide Double Nickase (h) FXR/NR1H4: sc-417410-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FXR/NR1H4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FXR/NR1H4 Double Nickase (h) et le plasmide FXR/NR1H4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NR1H4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FXR/NR1H4 Antibody (D-3): sc-25309
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FXR/NR1H4 | sc-417410-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FXR/NR1H4 | sc-417410-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR1H4 code le récepteur X farnésoïde (FXR), un récepteur nucléaire activé par les acides biliaires qui agit comme un facteur de transcription dépendant d’un ligand, contrôlant la synthèse, le transport et la détoxification des acides biliaires. Dans les hépatocytes et les entérocytes, FXR coordonne des programmes métaboliques et inflammatoires via des voies comprenant notamment la régulation de CYP7A1 par l’axe FXR–SHP, l’induction de transporteurs d’export et de captation des sels biliaires, ainsi que des interactions avec la signalisation FGF19/FGF15. En reliant l’homéostasie des acides biliaires au métabolisme des lipides et du glucose, FXR influence les réponses au stress cellulaire, la fonction barrière et la modulation immunitaire au sein de l’axe intestin–foie. Une signalisation FXR dérégulée est associée à des phénotypes hépatiques cholestatiques et métaboliques, et elle est étudiée dans des contextes tels que la stéatohépatite, la progression de la fibrose et la biologie des tumeurs hépatobiliaires.
FXR/NR1H4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NR1H4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NR1H4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NR1H4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NR1H4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.