Plasmide CRISPR d'Activation (h) FXR/NR1H4: sc-417410-ACT

NR1H4 code le récepteur X farnésoïde (FXR), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui agit comme capteur transcriptionnel des acides biliaires et coordonne des programmes géniques métaboliques. Dans les hépatocytes et les entérocytes, FXR régule la synthèse et le transport des acides biliaires (notamment via le contrôle par rétroaction de CYP7A1), l’homéostasie des lipides et du glucose, ainsi que la signalisation inflammatoire par des interactions avec des voies telles que SHP, FGF19/FGF15 et NF-κB. L’activité de FXR module la circulation entérohépatique et influence la fonction de barrière intestinale ainsi que la communication au sein de l’axe intestin–foie. Une dérégulation de la signalisation NR1H4/FXR a été impliquée dans les lésions hépatiques cholestatiques, la stéatose hépatique non alcoolique et la carcinogenèse hépatobiliaire, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de la biologie hépatique métabolique et inflammatoire.

FXR/NR1H4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NR1H4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FXR/NR1H4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NR1H4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NR1H4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FXR/NR1H4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NR1H4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FXR/NR1H4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FXR/NR1H4 dans les cellules tumorales présentant une expression de NR1H4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.