FucT-l CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420423

Übersicht

Fut1 kodiert die α(1,2)-Fucosyltransferase 1 (FucT‑1), eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die Fucose von GDP‑Fucose auf terminale Galactosereste überträgt und dadurch α1,2‑fucosylierte Glycane erzeugt, etwa H‑Typ‑Antigene auf Glykoproteinen und Glykolipiden. Dieser enzymatische Schritt ist ein zentraler Bestandteil der Reifung von Glycosphingolipiden und Glykoproteinen und prägt die Kohlenhydratmuster an der Zelloberfläche, die die Lektinbindung, die Membranorganisation und die interzelluläre Erkennung beeinflussen. Die Fut1‑abhängige Fucosylierung greift in Signalwege ein, die die epitheliale Differenzierung, die Funktion der mukosalen Barriere und die Wirt‑Mikroben‑Interaktionen steuern, indem sie glycanvermittelte Adhäsion und Signalgebung moduliert. Eine veränderte α1,2‑Fucosylierung wurde in verschiedenen Kontexten mit Entzündung und Immunfehlregulation in Verbindung gebracht, wodurch Fut1 einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zu glycanabhängigen Phänotypen darstellt.

Das FucT-l CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fut1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fut1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fut1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FucT-l-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fut1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FucT-l-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fut1-Exone abzielen, die für die FucT-l-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fut1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FucT-l CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FucT-l CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fut1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FucT-l HDR-Plasmid (m) und FucT-l HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fut1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fut1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.