FucT-IV Double Nickase Plasmid (h): sc-401795-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FucT-IV Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FucT-IV Double-Nickase-Plasmid (h) und FucT-IV Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FUT4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FucT-IV: sc-59531
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FucT-IV Double Nickase Plasmid (h) | sc-401795-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FucT-IV Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401795-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FUT4 kodiert die Alpha-(1,3)-Fucosyltransferase IV (FucT-IV), eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glycosyltransferase, die die terminale Fucosylierung von Glykanen katalysiert und dadurch Lewis‑Typ‑Kohlenhydrat-Epitope auf Glykoproteinen und Glykolipiden erzeugt. Indem FucT-IV die Glykanarchitektur der Zelloberfläche mitprägt, beeinflusst es selektinabhängige Adhäsion, Leukozytenmigration sowie allgemein glycosylierungsabhängige Signalwege und die Organisation von Rezeptoren. Die FUT4-Aktivität greift in Signalwege ein, die Zell‑Zell‑Interaktionen, Entzündung und Immunerkennung steuern, indem sie fucosylierte Liganden und glykanvermittelte Bindungsereignisse moduliert. Eine dysregulierte FUT4-Expression und veränderte Fucosylierungsmuster wurden mit Veränderungen in Tumorzelladhäsion, Invasion und Immunflucht in Verbindung gebracht, was FUT4 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien des Glykan-Remodelings in krankheitsrelevanten Kontexten macht.
FucT-IV Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FUT4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FUT4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FUT4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FUT4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.