Plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-IV (h): sc-401795

Présentation

FUT4 code la fucosyltransférase α1,3 résidente de l’appareil de Golgi, FucT‑IV, une enzyme qui transfère du fucose sur des accepteurs de N‑acétyllactosamine afin de générer des épitopes glycanes fucosylés, tels que des structures de type Lewis X, sur les glycoprotéines et les glycolipides. En modulant la glycosylation de surface, FucT‑IV influence l’adhésion médiée par les sélectines, le trafic des leucocytes, ainsi que plus largement la signalisation dépendante des glycannes et la dynamique des récepteurs. L’activité de FUT4 s’inscrit à l’interface du métabolisme du fucose et des voies de glycosylation qui régulent les interactions entre cellules immunitaires, les réponses inflammatoires et la migration cellulaire. Une expression dérégulée de FUT4 et des profils de fucosylation altérés ont été associés dans la littérature à l’invasivité des cellules tumorales, à des phénotypes d’adhésion liés aux métastases et à des modifications des interactions avec le microenvironnement immunitaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la biologie médiée par les glycannes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-IV (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FUT4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FUT4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FUT4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FucT-IV.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FUT4 pour l'étude de la signalisation de FucT-IV, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FUT4 essentiels à la fonction de FucT-IV
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FUT4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FucT-IV plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FucT-IV plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FUT4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FucT-IV plasmide HDR (h) et le FucT-IV (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FUT4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FUT4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.