frizzled-7 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420437-ACT

Das Mausgen **Fzd7** kodiert Frizzled-7, einen WNT-Rezeptor mit sieben Transmembrandomänen, der extrazelluläre WNT-Liganden an intrazelluläre Signalkaskaden koppelt, welche Zellpolarität, Proliferation und Differenzierung steuern. FZD7 ist sowohl an der kanonischen WNT/β-Catenin-Signalisierung als auch an nicht-kanonischen Signalwegen wie der planaren Zellpolarität (PCP) und dem WNT/Ca2+-Signalweg beteiligt und beeinflusst dadurch Transkriptionsprogramme sowie die Zytoskelettdynamik. In Entwicklungs- und adulten Geweben trägt Frizzled-7 zur Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen, zu epithelial-mesenchymalen Transitionen und zum Gewebeumbau bei. Eine fehlregulierte Fzd7-Signalisierung wird häufig im Kontext aberranter WNT-Aktivität untersucht, die mit onkogener Transformation, Fibrose und entzündlichen Mikroumgebungen in Verbindung steht, was sie für mechanistische Studien zu Signalweg-Crosstalk und der Kontrolle von Zellzuständen relevant macht.

frizzled-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Fzd7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

frizzled-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Fzd7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Fzd7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen frizzled-7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Fzd7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von frizzled-7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des frizzled-7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Fzd7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.