frizzled-10 Double Nickase Plasmid (h): sc-406690-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das frizzled-10 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- frizzled-10 Double-Nickase-Plasmid (h) und frizzled-10 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FZD10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
frizzled-10 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406690-NIC | 20 µg | $410.00 |
FZD10 kodiert Frizzled-10, einen Wnt-Rezeptor mit sieben Transmembrandomänen, der Wnt-Liganden bindet und sowohl die β‑Catenin‑abhängige Transkription als auch nicht-kanonische Wnt/Planar-Cell-Polarity- und Ca2+-gekoppelte Signalwege reguliert. Über diese Pfade beeinflusst Frizzled-10 Programme der Zellschicksalsfestlegung, Proliferation, Polarität und Migration, die für die Embryonalentwicklung und die Gewebehomöostase zentral sind. Eine fehlregulierte FZD10/Wnt-Signalgebung wurde in verschiedenen Tumorkontexten mit veränderten Differenzierungszuständen und onkogenen Signalnetzwerken in Verbindung gebracht und ist zudem relevant für Studien zu stammzellähnlichen Phänotypen und epithelial-mesenchymaler Dynamik. Als Oberflächenrezeptor stellt Frizzled-10 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um das Crosstalk zwischen Wnt‑, Wachstumsfaktor‑Signalgebung und Zytoskelett-Remodelling zu untersuchen.
frizzled-10 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FZD10-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FZD10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FZD10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FZD10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.