folliculin Plasmide Double Nickase (h): sc-403316-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- folliculin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il folliculin Double Nickase Plasmid (h) e il folliculin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FLCN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: folliculin Antibody (D-4): sc-271558
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
folliculin Plasmide Double Nickase (h) | sc-403316-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
folliculin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403316-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLCN codifica la follicolina, una proteina associata alla soppressione tumorale che coordina il rilevamento dei nutrienti, la segnalazione lisosomiale e il metabolismo cellulare attraverso interazioni con FNIP1/2 e la regolazione delle vie AMPK–mTORC1 e delle GTPasi Rag. La follicolina contribuisce al controllo dell’autofagia, all’omeostasi mitocondriale e a programmi trascrizionali legati a TFEB/TFE3, influenzando la biogenesi dei lisosomi e le risposte allo stress. Varianti con perdita di funzione in FLCN sono implicate nella sindrome di Birt–Hogg–Dubé e sono associate a una predisposizione ai tumori renali e alla formazione di cisti polmonari, rendendo FLCN un nodo chiave per lo studio dei meccanismi che collegano genotipo e fenotipo. La modulazione sperimentale della follicolina supporta indagini sull’omeostasi energetica, sul controllo della crescita cellulare e sulla differenziazione epiteliale rilevanti per la biologia delle malattie.
folliculin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLCN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLCN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLCN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLCN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.