FNDC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413674-ACT

FNDC1（fibronectin type III domain containing 1）は、フィブロネクチンIII型様モチーフを特徴とする細胞質タンパク質をコードしており、細胞接着、細胞骨格の組織化、シグナル伝達の制御に関与すると考えられています。報告されている機能的関連から、FNDC1はPI3K/AKTやMAPKシグナル伝達などの増殖因子応答性経路を介した細胞移動・増殖といったプロセス、ならびに細胞ストレス応答の調節に関与することが示唆されています。FNDC1の発現変動は複数の疾患関連コンテキストで観察されており、経路の再配線や表現型可塑性を研究するための標的として有用であることを支持しています。FNDC1を実験的に解析することで、細胞外からの刺激がヒト細胞において転写プログラムおよび細胞骨格プログラムへどのように統合されるのかを明らかにする手がかりになります。

FNDC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FNDC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FNDC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FNDC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFNDC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FNDC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFNDC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFNDC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFNDC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFNDC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。