Flotillin-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401200-ACT

Das humane Gen **FLOT2** kodiert Flotillin-2, ein membranassoziiertes Gerüstprotein, das in Lipid Rafts und caveolae-ähnlichen Mikrodomänen angereichert ist, Rezeptorkomplexe organisiert und die Membrankrümmung sowie endozytischen Transport beeinflusst. Flotillin-2 ist an der Signaltransduktion beteiligt, die mit Rezeptor-Tyrosinkinasen und der nachgeschalteten Aktivität der MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Signalwege verknüpft ist, und unterstützt so die Regulation von Zelladhäsion, Migration und Zytoskelettdynamik. Über seine Rolle bei der Organisation von Membran-Mikrodomänen und beim vesikulären Transport beeinflusst FLOT2 die Exosomenbiologie und die räumliche Kontrolle von Signal-Knotenpunkten an der Plasmamembran. Eine veränderte Expression oder Lokalisation von Flotillin-2 wurde bei mehreren Tumorarten sowie in anderen pathophysiologischen Kontexten beschrieben, in denen fehlregulierte Signalgebung und gestörter Membrantransport zu krankheitsassoziierten Phänotypen beitragen.

Flotillin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FLOT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Flotillin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FLOT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FLOT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Flotillin-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FLOT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Flotillin-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Flotillin-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FLOT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.