Plasmide Double Nickase (m) FKBP10: sc-420366-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) FKBP10 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FKBP10 Double Nickase (m) et le plasmide FKBP10 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Fkbp10. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FKBP10 Antibody (D-4): sc-390538
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) FKBP10 | sc-420366-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) FKBP10 | sc-420366-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fkbp10 code pour FKBP10, une peptidyl‑prolyl cis–trans isomérase de liaison à FK506 résidente du réticulum endoplasmique, qui agit comme chaperon spécifique du collagène lors du repliement et de la maturation du procollagène. FKBP10 soutient l’assemblage de la matrice extracellulaire en coordonnant la stabilisation de la triple hélice du collagène et en facilitant une sécrétion correcte, s’intégrant aux réseaux de protéostasie du RE comprenant le repliement assisté par des chaperons et le contrôle qualité. Dans les tissus murins riches en matrice conjonctive, l’activité de FKBP10 influence la biosynthèse du collagène, l’organisation des fibrilles et, en aval, les propriétés mécaniques des tissus. La dérégulation du traitement du collagène dépendant de FKBP10 est associée à des phénotypes héréditaires du tissu conjonctif et du squelette, faisant de Fkbp10 une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de pathologie liés à la matrice.
FKBP10 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fkbp10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fkbp10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fkbp10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fkbp10.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.