Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401978

Übersicht

EFEMP1 kodiert Fibulin‑3, ein sekretiertes Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das mit elastischen Fasern und Bestandteilen der Basalmembran assoziiert und so die Matrixassemblierung, die Zell‑Matrix‑Adhäsion und den Gewebeumbau reguliert. Fibulin‑3 moduliert die Proteaseaktivität und den Umsatz der extrazellulären Matrix, einschließlich Interaktionen, die das durch MMP/ADAMTS vermittelte Remodeling beeinflussen, und es wurde mit Signalzusammenhängen wie TGF‑β/SMAD in Verbindung gebracht, die fibrotische Prozesse und epithelial‑mesenchymale Programme koordinieren. In menschlichen Geweben ist die EFEMP1-Expression für die vaskuläre und okuläre Homöostase relevant, und veränderte Fibulin‑3-Spiegel wurden mit retinal degenerativen Phänotypen sowie mit Veränderungen der Stromastruktur in der Krebsbiologie assoziiert. Diese Funktionen machen EFEMP1 zu einem nützlichen Ansatzpunkt, um die Regulation der extrazellulären Matrix, Netzwerke sekretierter Proteine und mikroumgebungsabhängiges Zellverhalten zu untersuchen.

Das Fibulin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EFEMP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EFEMP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EFEMP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Fibulin-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EFEMP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Fibulin-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EFEMP1-Exone abzielen, die für die Fibulin-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EFEMP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Fibulin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Fibulin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EFEMP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Fibulin-3 HDR-Plasmid (h) und Fibulin-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EFEMP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EFEMP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.