Fibulin-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403644-NIC

FBLN2 codifica la fibulina-2, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare, arricchita nei tessuti elastici, che si lega a fibronectina, laminine e proteoglicani per regolare l’assemblaggio della matrice e la meccanica tissutale. La fibulina-2 partecipa all’adesione cellula–matrice, all’organizzazione della membrana basale e alla stabilizzazione delle fibre elastiche, influenzando processi quali il rimodellamento vascolare, la riparazione delle ferite e le interazioni epitelio–mesenchimali. Grazie ai suoi ruoli nell’organizzazione della matrice extracellulare e nella meccanotrasduzione, FBLN2 è spesso studiato in vie associate a fibrosi e rimodellamento tissutale, incluse le risposte legate al TGF-β e la segnalazione mediata dalle integrine. Un’espressione deregolata di FBLN2 e un’architettura stromale alterata sono state riportate in diverse patologie caratterizzate da deposizione anomala di matrice e comportamento invasivo, rendendolo rilevante per studi sulla biologia delle malattie guidata dal microambiente.

Fibulin-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FBLN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FBLN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FBLN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FBLN2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.