Fibrinogen β CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401819-ACT

FGB kodiert die Fibrinogen-β-Kette, einen essenziellen Bestandteil des Fibrinogen-Hexamers, der in der Endphase der Gerinnungskaskade durch Thrombin proteolytisch zu Fibrin umgewandelt wird. Zusammen mit Interaktionen mit dem Thrombozyten-Integrin αIIbβ3 und anderen Proteinen der extrazellulären Matrix unterstützt Fibrinogen die Gerinnselbildung, die Wundheilung und die Modulation der Rekrutierung entzündlicher Zellen. Die FGB-Expression ist eng mit akuten hepatischen Akutphasenreaktionen und Zytokin-Signalprogrammen verknüpft, die während einer systemischen Entzündung die Zusammensetzung der Plasmaproteine umgestalten. Genetische oder erworbene Störungen der Fibrinogenstruktur oder -menge wurden mit Blutungs- oder Thrombose-Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch FGB ein nützlicher Ansatzpunkt für die Untersuchung der Hämostase und entzündungsassoziierter vaskulärer Pathologie ist.

Fibrinogen β Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FGB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Fibrinogen β Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FGB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FGB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Fibrinogen β-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FGB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Fibrinogen β-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Fibrinogen β-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FGB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.