Plasmide CRISPR d'Activation (h) ferritin light chain: sc-400924-ACT

FTL code la chaîne légère de la ferritine, un composant central de la nanocage de ferritine qui tamponne le fer intracellulaire labile en stockant le Fe(III) et en limitant la production d’espèces réactives de l’oxygène catalysée par le fer. En coordonnant la séquestration du fer avec l’activité de la chaîne lourde de la ferritine et la ferritinophagie, FTL contribue à réguler l’équilibre rédox, la fonction mitochondriale et les réponses cellulaires au stress oxydatif. Une composition altérée de la ferritine ou une gestion perturbée du fer influence des voies associées à la sensibilité à la ferroptose et peut moduler les signalisations de stress inflammatoire et métabolique. Une expression dérégulée de FTL a été associée à des états de surcharge en fer ainsi qu’à des phénotypes neurodégénératifs et hématologiques où l’homéostasie du fer et les dommages oxydatifs sont des caractéristiques biologiques marquantes.

ferritin light chain Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FTL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ferritin light chain Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FTL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FTL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ferritin light chain. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FTL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ferritin light chain au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ferritin light chain dans les cellules tumorales présentant une expression de FTL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.