ferritin light chain CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400924-ACT

FTL kodiert die Ferritin‑Leichtkette, einen zentralen Bestandteil des Ferritin‑Nanokäfigs, der intrazelluläres labiles Eisen puffert, indem er Fe(III) speichert und die durch Eisen katalysierte Bildung reaktiver Sauerstoffspezies begrenzt. Durch die Koordination der Eisensequestrierung mit der Aktivität der Ferritin‑Schwerkette und der Ferritinophagie trägt FTL zur Regulation des Redoxgleichgewichts, der mitochondrialen Funktion und zellulärer Antworten auf oxidativen Stress bei. Veränderungen in der Ferritin‑Zusammensetzung oder im Eisenhandling beeinflussen Signalwege, die mit der Anfälligkeit für Ferroptose verknüpft sind, und können inflammatorische sowie metabolische Stress‑Signalgebung modulieren. Eine dysregulierte FTL‑Expression wurde mit Eisenüberladungssyndromen sowie neurodegenerativen und hämatologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, bei denen Eisenhomöostase und oxidative Schäden ausgeprägte biologische Merkmale sind.

ferritin light chain Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FTL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ferritin light chain Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FTL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FTL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ferritin light chain-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FTL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ferritin light chain-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ferritin light chain-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FTL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.