ferritin heavy chain Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418152

Panoramica

FTH1 codifica la catena pesante della ferritina, una subunità catalitica del complesso della ferritina che ossida Fe2+ a Fe3+ e consente un immagazzinamento intracellulare sicuro del ferro. Tamponando il ferro labile e limitando la formazione di specie reattive dell’ossigeno indotta dal ferro, FTH1 contribuisce all’omeostasi redox, alla funzione mitocondriale e alla protezione dal danno ossidativo. Le dinamiche della ferritina si intrecciano con le vie di captazione ed esportazione del ferro, inclusi l’endocitosi mediata dal recettore della transferrina e l’efflusso dipendente dalla ferroportina, plasmando le risposte cellulari a ipossia, infiammazione e stress metabolico. Un’espressione deregolata di FTH1 o un metabolismo alterato della ferritina sono spesso studiati in contesti di sovraccarico di ferro, neurodegenerazione, infiammazione associata a infezioni e biologia tumorale, in cui la disponibilità di ferro influenza la proliferazione e i programmi di morte cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ferritin heavy chain (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FTH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FTH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FTH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ferritin heavy chain.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FTH1 per lo studio della segnalazione di ferritin heavy chain, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FTH1 critici per la funzione di ferritin heavy chain
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FTH1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ferritin heavy chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ferritin heavy chain CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FTH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ferritin heavy chain Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ferritin heavy chain (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FTH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FTH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.