Plásmido CRISPR de Activación (h) FBL2: sc-403555-ACT

FBXL2 (FBL2) codifica una proteína tipo F-box que funciona como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos de ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), conectando dianas específicas con la degradación proteasomal dependiente de ubiquitina. Mediante el recambio regulado de proteínas de señalización y del ciclo celular, FBXL2 contribuye al control de la proliferación, la apoptosis y las vías de respuesta al estrés, incluidas redes de señalización que convergen en MAPK y en salidas de la inmunidad innata. La alteración de la expresión o la actividad de FBXL2 se ha asociado con una homeostasis proteica desregulada y con señalización inflamatoria, procesos implicados con frecuencia en la biología del cáncer y en patologías mediadas por el sistema inmunitario. Como nodo del sistema ubiquitina–proteasoma, FBXL2 se estudia habitualmente en contextos relacionados con la proteostasis, la regulación de puntos de control y la reorganización de vías durante la transformación celular.

FBL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FBXL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FBL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FBXL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FBXL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FBL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FBXL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FBL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FBL2 en células tumorales con expresión de FBXL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.