Fascin 2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-433603-ACT

Das Mausgen *Fscn2* kodiert Fascin 2, ein Aktin-bündelndes Protein, das parallele F‑Aktin-Arrays organisiert und Membranfortsätze, Zellform sowie die Stabilität des Zytoskeletts unterstützt. Proteine der Fascin-Familie tragen zum Umbau von Aktinfilamenten bei, der mit Adhäsionsdynamik und motilitätsassoziierten Prozessen verknüpft ist, und verbinden so die zytoskelettale Architektur mit Mechanotransduktion und polarisierter Zellorganisation. In sensorischen und epithelialen Kontexten ist Fascin 2 mit spezialisierten, aktinreichen Strukturen assoziiert und damit relevant für die Untersuchung der Aufrechterhaltung des Zytoskeletts und der Gewebeintegrität. Eine fehlregulierte Aktinbündelung und ein fascinvermittelter Umbau wurden in Modellen degenerativer und proliferativer Erkrankungen mit zellulären Funktionsstörungen in Verbindung gebracht, was die Untersuchung *Fscn2*-abhängiger Signalwege in Maus-Systemen unterstützt.

Fascin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Fscn2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Fascin 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Fscn2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Fscn2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Fascin 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Fscn2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Fascin 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Fascin 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Fscn2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.