FANCI Plasmide Double Nickase (h): sc-402229-NIC

FANCI codifica una componente centrale della via di riparazione del DNA dell’anemia di Fanconi (FA), che salvaguarda la stabilità del genoma durante la replicazione del DNA. In condizioni di stress replicativo o di danno da crosslink interfilamento, FANCI forma un eterodimero con FANCD2 e viene monoubiquitinata per favorire il reclutamento dei fattori di riparazione a valle coinvolti nell’elaborazione nucleolitica coordinata, nella sintesi di translesione e nella ricombinazione omologa. Attraverso queste funzioni, FANCI contribuisce alla protezione delle forcelle di replicazione bloccate, alla segnalazione del checkpoint della fase S e alla soppressione delle aberrazioni cromosomiche. L’alterazione dei geni della via FA, incluso FANCI, è associata all’anemia di Fanconi e a difetti di riparazione del DNA più ampi e rilevanti per il cancro, rendendo FANCI un nodo utile per studiare i meccanismi di instabilità genomica.

FANCI Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FANCI nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FANCI. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FANCI. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FANCI interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.