Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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FANCI Double Nickase Plasmid (h): sc-402229-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FANCI Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FANCI Double-Nickase-Plasmid (h) und FANCI Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FANCI abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FANCI: sc-271316
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FANCI Double Nickase Plasmid (h) | sc-402229-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FANCI Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402229-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FANCI kodiert eine zentrale Komponente des Fanconi-Anämie-(FA)-DNA-Reparaturwegs, der während der DNA-Replikation die Genomstabilität schützt. Bei Replikationsstress oder Schäden durch intersträngige Quervernetzungen bildet FANCI ein Heterodimer mit FANCD2 und wird monoubiquitinyliert, wodurch die Rekrutierung nachgeschalteter Reparaturfaktoren gefördert wird, die an der koordinierten nukleolytischen Prozessierung, der Translesionssynthese und der homologen Rekombination beteiligt sind. Über diese Funktionen trägt FANCI zum Schutz stehengebliebener Replikationsgabeln, zur Signalgebung des S-Phasen-Checkpoints und zur Unterdrückung chromosomaler Aberrationen bei. Störungen in Genen des FA-Signalwegs, einschließlich FANCI, sind mit der Fanconi-Anämie und darüber hinaus mit für Krebs relevanten Defekten der DNA-Reparatur verknüpft, was FANCI zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen der Genominstabilität macht.
FANCI Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FANCI-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FANCI abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FANCI-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FANCI-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.