FAM20A Lentiviral Activation Particles (h): sc-409969-LAC

FAM20A kodiert ein sekretiertes Protein des ER‑Golgi‑Sekretionswegs, das innerhalb der FAM20‑Familie als Pseudokinase fungiert und die Aktivität sowie den Transport von Kinasen des sekretorischen Weges moduliert. Dadurch beeinflusst es die extrazelluläre Proteinphosphorylierung und Prozesse der Biomineralisation. Es ist an der Regulation der Schmelzbildung und der Mineralhomöostase beteiligt, unter anderem über Effekte auf sekretierte Matrixproteine und Golgi‑assoziierte Verarbeitungsschritte. Eine veränderte FAM20A‑Funktion wurde mit amelogenesebezogenen Phänotypen und Erkrankungen mit ektoper Verkalkung in Verbindung gebracht und ist daher für Studien zur Mineralisationsbiologie und zur Regulation des sekretorischen Weges relevant. In zellbasierten Modellen wird FAM20A häufig im Hinblick auf seinen Einfluss auf die Zusammensetzung der extrazellulären Matrix, die Proteinsekretion und Netzwerke posttranslationaler Modifikationen untersucht.

FAM20A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente FAM20A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

FAM20A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der FAM20A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen FAM20A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen FAM20A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.