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FAM148CCRISPR激活质粒(h) | sc-414279-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 C2CD4C 基因编码 FAM148C,这是一种推定含 C2 结构域的蛋白,可能参与钙依赖性的膜相关过程和细胞内信号传导。尽管其分子互作伙伴尚未完全明确,表达研究和遗传关联研究已将 C2CD4C 与内分泌及代谢调控联系起来,包括胰岛生物学以及与胰岛素分泌相关的通路。C2CD4C 附近的变异与 2 型糖尿病及相关心代谢性状的易感性有关,这也支持在基因调控、刺激-分泌偶联以及代谢细胞状态转换等研究中使用该基因。调控 FAM148C 的表达水平有助于解析钙响应型信号节点如何在疾病相关细胞类型中影响转录程序。
FAM148C CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性C2CD4C的表达。
FAM148C CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的C2CD4C基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于C2CD4C转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性FAM148C表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的C2CD4C位点,并能够研究内源性位点上依赖于FAM148C的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在C2CD4C表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟FAM148C通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。