Particules Lentivirales d'Activation (h) FAK: sc-400089-LAC

PTK2 code la focal adhesion kinase (FAK), une tyrosine kinase non réceptrice qui intègre les signaux issus des intégrines et des récepteurs des facteurs de croissance afin de réguler le renouvellement des adhérences focales, le remodelage du cytosquelette d’actine et la mécanotransduction. FAK coordonne des voies en aval, notamment PI3K–AKT, MAPK/ERK et la signalisation des GTPases de la famille Rho, pour contrôler la migration, la survie et la prolifération cellulaires. Une activité de FAK dérégulée et une signalisation des adhérences focales altérée sont fréquemment associées à des phénotypes invasifs, au remodelage de la matrice extracellulaire et à des programmes transcriptionnels liés aux métastases dans de nombreux types de cancer. En outre, la signalisation PTK2/FAK contribue à l’angiogenèse, à la perception de la matrice associée à la fibrose et au trafic des cellules inflammatoires, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude des réseaux de signalisation dépendants de l’adhérence.

Les particules d'activation lentivirales FAK (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PTK2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FAK (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PTK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FAK. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PTK2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.