FAK Plasmide Double Nickase (m): sc-420280-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAK Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAK Double Nickase Plasmid (m) e il FAK Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ptk2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAK Antibody (D-1): sc-271126
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAK Plasmide Double Nickase (m) | sc-420280-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FAK Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420280-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Ptk2** codifica la **focal adhesion kinase (FAK)**, una tirosin-chinasi non recettoriale che integra la segnalazione mediata da integrine e fattori di crescita per coordinare il turnover delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro di actina e la meccanotrasduzione. Le funzioni di scaffold dipendenti dalla fosforilazione di FAK collegano l’interazione con la matrice extracellulare a vie a valle che includono PI3K–AKT, MAPK/ERK e la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho, regolando così migrazione, sopravvivenza e proliferazione cellulari. Modelli in vivo e cellulari associano un’attività alterata di FAK a dinamiche di adesione anomale, comportamento invasivo e rimodellamento fibro-infiammatorio, rendendo **Ptk2** un nodo chiave negli studi sulle interazioni del microambiente tumorale e sull’omeostasi tissutale.
FAK Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ptk2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ptk2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ptk2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ptk2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.