FADS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404735-ACT

FADS1は脂肪酸デサチュラーゼ1をコードしており、小胞体に局在するΔ5デサチュラーゼとして、長鎖多価不飽和脂肪酸（PUFA）の生合成における重要な反応を触媒します。具体的には、ジホモ-γ-リノレン酸をアラキドン酸へ、エイコサテトラエン酸をエイコサペンタエン酸へ変換します。細胞内のω-6およびω-3 PUFAプールを規定することで、FADS1は膜組成、脂質メディエーター産生、ならびに炎症や代謝恒常性に関連する下流シグナル伝達に影響します。FADS1の変異や発現制御の破綻は、脂質プロファイルの変化や、心代謝・炎症生物学に関わる複雑形質への感受性と関連づけられています。細胞・組織モデルでは、FADS1活性は脂肪酸の伸長／不飽和化ネットワークや、エイコサノイドおよび特化型炎症終結性メディエーター（SPM）前駆体を制御する経路の文脈で検討されることが一般的です。

FADS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FADS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FADS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FADS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFADS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FADS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFADS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFADS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFADS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFADS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。