FAAH Plasmide Double Nickase (h): sc-402470-NIC

L’idrolasi delle ammidi degli acidi grassi (FAAH) è un’idrolasi a serina associata alle membrane che termina la segnalazione idrolizzando endocannabinoidi come l’anandamide e N-aciletanolammidi correlate. Controllando la disponibilità dei ligandi per i recettori dei cannabinoidi e per altre vie di segnalazione sensibili ai lipidi, FAAH influenza la trasmissione sinaptica, la segnalazione neuroinfiammatoria, l’elaborazione nocicettiva e l’omeostasi metabolica. L’attività di FAAH è strettamente legata al turnover dei mediatori lipidici nel reticolo endoplasmatico e si intreccia con reti più ampie dell’acido arachidonico e degli eicosanoidi. Un’espressione o un’attività di FAAH deregolata è stata studiata nel contesto della biologia del dolore, di fenotipi correlati all’ansia, di comportamenti legati all’uso di sostanze e di disturbi infiammatori o metabolici, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici della segnalazione lipidica.

FAAH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FAAH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FAAH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FAAH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FAAH interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.