Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) EWS: sc-401036-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EWS correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EWS Double Nickase (h) et le plasmide EWS Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EWSR1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EWS Antibody (G-5): sc-28327
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EWS | sc-401036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EWS | sc-401036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EWSR1 code la protéine EWS de liaison à l’ARN, un régulateur multifonctionnel de la transcription et du traitement de l’ARN qui couple l’épissage co‑transcriptionnel au transport et à la stabilité de l’ARN. EWS participe au contrôle transcriptionnel associé à la chromatine et est impliquée dans les réponses aux dommages de l’ADN et le maintien de l’intégrité du génome via des interactions avec l’ARN polymérase II et des complexes de maturation de l’ARN. La dérégulation d’EWSR1, notamment les réarrangements chromosomiques générant des protéines de fusion oncogéniques, constitue une caractéristique moléculaire déterminante de plusieurs sarcomes et d’autres cancers. Une fonction EWS altérée peut perturber les programmes d’expression génique, le métabolisme de l’ARN et des réseaux de signalisation contrôlant la prolifération et la différenciation, ce qui en fait une cible majeure pour des études mécanistiques.
EWS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EWSR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EWSR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EWSR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EWSR1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.