Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ETBR Double Nickase Plasmid (h): sc-401804-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ETBR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ETBR Double-Nickase-Plasmid (h) und ETBR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EDNRB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ETBR: sc-293198
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ETBR Double Nickase Plasmid (h) | sc-401804-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ETBR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401804-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EDNRB kodiert den Endothelinrezeptor Typ B (ETBR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der Endothelinpeptide bindet und dadurch den intrazellulären Calciumfluss, die Phospholipase‑C‑Signalgebung sowie nachgeschaltete MAPK/ERK‑ und PI3K‑assoziierte Signalwege reguliert. Die ETBR‑Aktivität trägt über endothelinabhängige Signalnetzwerke zur Migration und Differenzierung von Neuralleistenzellen, zur Entwicklung von Melanozyten und zur Kontrolle des Gefäßtonus bei. In der Humanbiologie ist eine Fehlfunktion von EDNRB mit Störungen der Entwicklung des enterischen Nervensystems wie dem Morbus Hirschsprung sowie mit Pigmentierungsphänotypen verknüpft, was seine Rolle in der Entwicklungsmusterbildung und in Programmen der Zellmotilität widerspiegelt. Veränderte EDNRB‑Signalgebung wird zudem im Zusammenhang mit Interaktionen zwischen Tumorzellen und ihrer Mikroumgebung sowie mit Linienplastizität untersucht, was EDNRB für mechanistische Studien zur GPCR‑Signalübertragung und zu Entwicklungswegen relevant macht.
ETBR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EDNRB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EDNRB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EDNRB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EDNRB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.