Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Estrogen Receptor beta Double Nickase Plasmid (m): sc-420232-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Estrogen Receptor beta Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Estrogen Receptor beta Double-Nickase-Plasmid (m) und Estrogen Receptor beta Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Esr2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Estrogen Receptor beta: sc-390243
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Estrogen Receptor beta Double Nickase Plasmid (m) | sc-420232-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Estrogen Receptor beta Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420232-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Esr2 kodiert den Östrogenrezeptor beta (ERβ), einen ligandaktivierten nukleären Rezeptor, der als Transkriptionsfaktor wirkt und Gene reguliert, die an der Reproduktionsbiologie, neuronalen Signalübertragung, Immunmodulation und Gewebehomöostase beteiligt sind. Nach Bindung von Östrogen interagiert ERβ mit Östrogen-Response-Elementen und Koregulator-Komplexen, um den Chromatinzustand und die Transkription innerhalb von Steroidhormon-Signalnetzwerken zu steuern, mit ausgeprägtem Crosstalk zu den MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Signalwegen. Die ERβ-Aktivität beeinflusst die Zellzykluskontrolle, Differenzierungsprogramme, die mitochondriale Funktion und die Expression entzündungsrelevanter Gene in kontextabhängiger Weise. Eine dysregulierte Esr2-Signalgebung wurde in Mausmodellen mit veränderten Fertilitätsphänotypen, neuroverhaltensbezogenen Veränderungen und hormonabhängiger Pathophysiologie in Verbindung gebracht, die für metabolische und entzündliche Erkrankungen relevant ist.
Estrogen Receptor beta Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Esr2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Esr2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Esr2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Esr2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.