Estrogen Receptor alpha Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-418925-LAC

Il gene murino *Esr1* codifica il recettore degli estrogeni alfa (ERα), un recettore nucleare attivato dal legando che funziona da fattore di trascrizione, collegando la segnalazione estrogenica a vasti programmi di identità cellulare, proliferazione e differenziamento. Una volta attivato, ERα si lega agli elementi di risposta agli estrogeni e coopera con cofattori per regolare l’accessibilità della cromatina e la trascrizione, attivando anche una segnalazione rapida non genomica attraverso le vie MAPK e PI3K/AKT. L’attività di ERα interseca la segnalazione di citochine e fattori di crescita, influenzando metabolismo, polarizzazione delle cellule immunitarie e rimodellamento tissutale in organi riproduttivi e non riproduttivi. La disregolazione della segnalazione di ERα è ampiamente studiata nella biologia ormono-responsiva e nei meccanismi alla base della perturbazione endocrina, del rimodellamento associato all’infiammazione e delle reti trascrizionali oncogeniche.

Le particelle di attivazione lentivirale Estrogen Receptor alpha (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Esr1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Estrogen Receptor alpha (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Esr1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Estrogen Receptor alpha. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Esr1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.