Espin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403106-ACT

ヒトESPNは、微絨毛（microvilli）やステレオシリア（stereocilia）における平行なアクチンフィラメント束の組み立てと安定性を制御する、アクチン束化タンパク質であるエスピン（espin）をコードしている。エスピンは、アクチン動態と膜関連スキャフォールディングを協調させることで、特化した突起の形態形成、機械感覚器官の構築、ならびに細胞骨格のリモデリングを支える。ステレオシリアの組織化への影響を介して、ESPNは感覚有毛細胞の機能と関連し、上皮表面の特殊化やメカノトランスダクション（機械刺激の変換）を制御する経路の研究対象となっている。ESPNの発現異常や遺伝学的改変は、遺伝性難聴やステレオシリア構造の異常などと関連づけられており、細胞骨格に起因する疾患メカニズムの解明において重要である。

Espin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ESPNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Espin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ESPN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はESPN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Espinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のESPN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEspin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびESPN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEspin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。