ERp57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-420698-KO-2

Übersicht

Pdia3 kodiert ERp57, eine Protein-Disulfid-Isomerase des endoplasmatischen Retikulums, die mit Calnexin und Calreticulin zusammenwirkt, um während der Faltung von Glykoproteinen die Bildung und Isomerisierung von Disulfidbrücken zu katalysieren. ERp57 unterstützt die Qualitätskontrolle im ER und die Proteostase, indem es die Reifung sekretorischer und Membranproteine fördert und unter Bedingungen von ER-Stress die Signalübertragung der Unfolded-Protein-Response beeinflusst. Im Immunsystem trägt ERp57 als Teil des Peptid-Beladungskomplexes zur Peptidbeladung von MHC-Klasse-I-Molekülen bei und verknüpft damit redoxabhängige Faltungsprozesse mit der Antigenpräsentation. Eine veränderte ERp57-Aktivität wurde mit gestörter Protein-Homöostase und Signalwegen des oxidativen Stresses in Verbindung gebracht, die für die Forschung zu Neurodegeneration, metabolischen Dysfunktionen und Krebsbiologie relevant sind.

Das ERp57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pdia3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pdia3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pdia3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ERp57-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pdia3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ERp57-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pdia3-Exone abzielen, die für die ERp57-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pdia3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ERp57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ERp57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pdia3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ERp57 HDR-Plasmid (m) und ERp57 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pdia3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pdia3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.