Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERM Double Nickase Plasmid (h): sc-401161-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ERM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ERM Double-Nickase-Plasmid (h) und ERM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ETV5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ERM: sc-100941
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ERM Double Nickase Plasmid (h) | sc-401161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ETV5 kodiert den ETS-Familien-Transkriptionsfaktor ERM, ein nukleares DNA-bindendes Protein, das Genexpressionsprogramme reguliert, die an Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Migration beteiligt sind. ERM wirkt nachgeschaltet von Rezeptortyrosinkinasen-Signalwegen, einschließlich FGF/MAPK-Pfaden, und integriert Entwicklungs- sowie Gewebeumbau-Signale, indem es die Transkription von Zielgenen steuert, die mit Wachstum und Differenzierung assoziiert sind. Eine fehlregulierte ETV5-Aktivität wurde in mehreren Krankheitskontexten mit veränderter epithelial-mesenchymaler Dynamik, invasionsassoziierten transkriptionellen Zuständen und Linienplastizität in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Umverdrahtung transkriptioneller Netzwerke macht. Als sequenzspezifischer Regulator dient ERM außerdem als gut handhabbares Modellsystem, um die Kooperativität von ETS-Faktoren, die Nutzung von Enhancern und die chromatinabhängige Kontrolle der Transkription zu untersuchen.
ERM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ETV5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ETV5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ETV5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ETV5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.