Erg-1/2/3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400404-ACT

ERG codifica um fator de transcrição da família ETS (Erg-1/2/3) que se liga a motivos de DNA ricos em purinas para regular programas gênicos que controlam o desenvolvimento hematopoético, a diferenciação endotelial e decisões de destino celular. O ERG integra sinais das vias associadas a MAPK/ERK e PI3K para coordenar redes transcricionais envolvidas em proliferação, adesão e homeostase vascular. A expressão desregulada ou rearranjos de ERG são frequentemente estudados na reprogramação transcricional oncogênica, incluindo leucemias e câncer de próstata, e também são relevantes para a angiogênese e a biologia vascular inflamatória. Essas características fazem do ERG um nó amplamente utilizado para dissecar circuitos transcricionais que especificam linhagens e redes de regulação gênica associadas a doenças.

Erg-1/2/3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ERG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Erg-1/2/3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ERG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ERG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Erg-1/2/3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ERG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Erg-1/2/3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Erg-1/2/3 em células tumorais com expressão de ERG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.