eRF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405156-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eRF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eRF1 Double Nickase Plasmid (h) e il eRF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ETF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eRF1 Antibody (B-11): sc-365686
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eRF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405156-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eRF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405156-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ETF1 umano codifica il fattore di rilascio eucariotico 1 (eRF1), un fattore essenziale della terminazione della traduzione che riconosce tutti e tre i codoni di stop e, in collaborazione con eRF3/GSPT1, promuove l’idrolisi del peptidil-tRNA nel sito A del ribosoma. Grazie al suo ruolo centrale nella proteostasi, eRF1 contribuisce a mantenere l’accuratezza della traduzione dell’mRNA e a limitare il readthrough dei codoni di stop, collegando l’attività di ETF1 ai meccanismi di controllo qualità del ribosoma e a vie di sorveglianza come il decadimento dell’mRNA mediato da nonsense (NMD). Alterazioni della terminazione della traduzione possono rimodellare la segnalazione della risposta allo stress, il carico di ripiegamento proteico e i programmi globali di espressione genica rilevanti per l’omeostasi cellulare. ETF1 è quindi di interesse negli studi sul controllo della traduzione, sul riconoscimento dei codoni e sui meccanismi che collegano la dinamica ribosomiale a squilibri del proteoma associati a malattia.
eRF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ETF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ETF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ETF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ETF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.