Particules Lentivirales d'Activation (h) ErbB2/HER2: sc-400138-LAC

ERBB2 code la tyrosine kinase réceptrice ErbB2/HER2, membre orphelin de ligand de la famille EGFR/ErbB, qui agit comme partenaire privilégié d’hétérodimérisation afin d’amplifier la signalisation des facteurs de croissance. Lors de la dimérisation, HER2 active en aval les cascades PI3K–AKT–mTOR et RAS–RAF–MEK–ERK, coordonnant des programmes de prolifération, de survie, de différenciation et de métabolisme. La signalisation d’ERBB2 s’interface également avec les réseaux SRC/FAK et d’adhérence cellule–cellule, influençant la dynamique du cytosquelette et le comportement migratoire. Une expression d’ERBB2 dérégulée ou une hyperactivation de la voie est fortement associée à la transformation oncogénique et fait l’objet de nombreuses études en tant que moteur de l’aptitude des cellules tumorales et de la plasticité de signalisation dans de multiples contextes tissulaires.

Les particules d'activation lentivirales ErbB2/HER2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ERBB2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ErbB2/HER2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ERBB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ErbB2/HER2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ERBB2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.