Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
ephrin-A5 Double Nickase Plasmid (m): sc-420123-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ephrin-A5 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ephrin-A5 Double-Nickase-Plasmid (m) und ephrin-A5 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Efna5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ephrin-A5: sc-81945
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ephrin-A5 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420123-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ephrin-A5 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420123-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Efna5 kodiert Ephrin-A5, einen GPI-verankerten Liganden für EphA-Rezeptor-Tyrosinkinasen, der kontaktabhängige Signale vermittelt, um während der Entwicklung des Nervensystems die Zellpositionierung, Grenzbildung und Axonführung zu koordinieren. Ephrin-A5–EphA-Interaktionen regulieren über GTPasen der Rho-Familie den Umbau des Zytoskeletts und die Adhäsionsdynamik und beeinflussen dadurch Neuritenauswuchs, synaptisches Targeting und Gewebemusterbildung. In Mausmodellen wurde veränderte Ephrin-A5-Signalgebung mit Defekten in der corticothalamischen und retinalen Axonverschaltung, der Hippocampus-Verschaltung und weiteren neuroentwicklungsbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht. Eine Fehlregulation von Eph/Ephrin-Signalwegen wird zudem im Kontext abweichender Zellmigration und Invasion untersucht, wodurch Efna5 ein relevantes Ziel für mechanistische Forschung in der Entwicklungsneurobiologie und krankheitsassoziierter Signalgebung ist.
ephrin-A5 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Efna5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Efna5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Efna5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Efna5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.