ephrin-A5 Double Nickase Plasmid (h): sc-402127-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ephrin-A5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ephrin-A5 Double-Nickase-Plasmid (h) und ephrin-A5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EFNA5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ephrin-A5: sc-81945
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ephrin-A5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402127-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ephrin-A5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402127-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EFNA5 kodiert Ephrin-A5, einen über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) in der Membran verankerten Liganden für EphA‑Rezeptor-Tyrosinkinasen, der kontaktabhängige Signalübertragung vermittelt, um Zellpositionierung, Grenzbildung und Axonführung zu koordinieren. Interaktionen zwischen Ephrin-A5 und Eph regulieren den Umbau des Zytoskeletts und die Dynamik der Zelladhäsion über Signalwege, an denen GTPasen der Rho‑Familie, Fokaladhäsions-Signale und die endozytoseabhängige Internalisierung von Rezeptor‑Ligand‑Komplexen beteiligt sind. In menschlichen Geweben trägt Ephrin-A5 zum Aufbau neuronaler Schaltkreise bei und kann Zellmigration sowie Programme der Gewebemusterbildung beeinflussen, die bei Krankheiten häufig umprogrammiert sind. Veränderte EFNA5/EphA‑Signalgebung wurde unter anderem im Zusammenhang mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und mit fehlreguliertem Wachstum bzw. invasionsassoziiertem Verhalten in Krebsmodellen untersucht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Signalwegstudien unterstützt.
ephrin-A5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EFNA5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EFNA5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EFNA5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EFNA5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.