EphA7 Double Nickase Plasmid (m): sc-420197-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EphA7 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EphA7 Double-Nickase-Plasmid (m) und EphA7 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Epha7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EphA7: sc-393973
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EphA7 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420197-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA7 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420197-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Epha7 kodiert für EphA7, eine Rezeptor-Tyrosinkinase der Ephrin/Eph-Familie, die kontaktabhängige Signalübertragung vermittelt und während der Entwicklung die Zellpositionierung, Grenzbildung und Axonführung reguliert. Nach Bindung eines Ephrin-Liganden aktiviert EphA7 Signalwege, an denen Rho-Familien-GTPasen, MAPK-Signalisierung und Zytoskelett-Umbau beteiligt sind, und steuert damit Programme für Migration und Adhäsion. Im Nervensystem trägt EphA7 zum Aufbau neuronaler Schaltkreise und zur synaptischen Organisation bei; veränderte Eph/Ephrin-Signalisierung wurde mit Defekten in der neuroentwicklungsbedingten Musterbildung und einer gestörten Gewebearchitektur in Verbindung gebracht. Da Eph-Rezeptoren auch Entscheidungen zu Proliferation und Differenzierung beeinflussen, wird Epha7 häufig in Kontexten untersucht, in denen Zell-Zell-Kommunikation und räumliche Organisation krankheitsrelevante Phänotypen prägen.
EphA7 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Epha7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Epha7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Epha7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Epha7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.