EPCR Double Nickase Plasmid (h): sc-402158-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EPCR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EPCR Double-Nickase-Plasmid (h) und EPCR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PROCR abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EPCR: sc-53982
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EPCR Double Nickase Plasmid (h) | sc-402158-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EPCR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402158-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PROCR kodiert den endothelialen Protein‑C‑Rezeptor (EPCR), ein Typ‑I‑Membran‑Glykoprotein, das überwiegend im Gefäßendothel exprimiert wird und Protein C sowie aktiviertes Protein C bindet, um antikoagulatorische und zytoprotektive Signalwege an der Zelloberfläche zu lokalisieren. EPCR wirkt mit der durch Thrombomodulin und Thrombin vermittelten Aktivierung von Protein C zusammen und unterstützt proteaseaktivierte Rezeptor‑abhängige Signalwege, die die Endothelbarrierefunktion, Entzündungsprozesse und die Leukozytenmigration beeinflussen. Eine veränderte EPCR‑Expression oder ein vermehrtes Shedding kann das hämostatische Gleichgewicht und die vaskuläre Homöostase stören und verbindet die PROCR‑Biologie mit Thrombosen, entzündlichen Vaskulopathien und endothelialer Dysfunktion. Als Oberflächenrezeptor mit definierten Ligandeninteraktionen wird EPCR zudem als mechanistischer Readout für das Zusammenspiel von Gerinnung und Entzündung in Zell‑ und Gefäßmodellen genutzt.
EPCR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PROCR-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PROCR abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PROCR-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PROCR-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.