EPCR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402158-ACT

PROCR kodiert den endothelialen Protein‑C‑Rezeptor (EPCR), einen auf der Zelloberfläche befindlichen Rezeptor, der besonders stark auf Endothelzellen vorkommt und Protein C sowie aktiviertes Protein C bindet, um die Blutgerinnung und die vaskuläre Homöostase zu regulieren. EPCR ist über den Protein‑C‑Signalweg an antikoagulatorischen und zytoprotektiven Signalen beteiligt und steht in Wechselwirkung mit PAR‑abhängigen Antworten, die die Integrität der endothelialen Barriere und den Entzündungsstatus beeinflussen. Eine veränderte EPCR‑Expression oder ein verstärktes Shedding wurde mit thromboinflammatorischen Prozessen, endothelialer Dysfunktion und vaskulären Komplikationen in Verbindung gebracht, die für die Sepsis‑Biologie und Mechanismen kardiovaskulärer Erkrankungen relevant sind. Als Marker und Regulator des endothelialen Zustands wird EPCR häufig in Modellen der Hämostase, der Leukozyten‑Endothel‑Interaktionen und der mikrovaskulären Schädigung untersucht.

EPCR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PROCR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EPCR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PROCR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PROCR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EPCR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PROCR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EPCR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EPCR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PROCR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.