Plasmide Double Nickase (h) ENSA: sc-403380-NIC

ENSA (endosulfine alpha) est une petite phosphoprotéine conservée qui module l’activité des phosphatases sérine/thréonine, notamment en inhibant les complexes PP2A‑B55. Grâce à cette régulation, ENSA contribue au contrôle temporel du cycle cellulaire, à l’entrée et à la sortie de mitose, ainsi qu’au contrôle, dépendant de la phosphorylation, de nœuds de signalisation coordonnant la prolifération et les réponses au stress cellulaire. ENSA s’inscrit dans des circuits kinase–phosphatase liés à l’activité des CDK et au contrôle des points de contrôle, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fidélité mitotique et de la robustesse des voies de signalisation. Des réseaux de phosphorylation altérés impliquant la régulation de PP2A sont fréquemment mis en cause dans le cancer et les maladies neurodégénératives, ce qui positionne ENSA comme une cible utile pour l’analyse mécanistique des voies.

ENSA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ENSA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ENSA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ENSA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ENSA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.