Plásmido CRISPR de Activación (h) Endothelin-3/EDN3/ET-3: sc-404436-ACT

EDN3 codifica la endotelina-3 (ET-3), un péptido vasoactivo secretado de la familia de las endotelinas que señala principalmente a través del receptor de endotelina tipo B (EDNRB) para regular la migración de células derivadas de la cresta neural, la especificación del linaje de los melanocitos y el desarrollo del sistema nervioso entérico. ET-3 contribuye al control paracrino del tono del músculo liso y a la homeostasis vascular mediante vías mediadas por GPCR que activan la fosfolipasa C, los flujos intracelulares de calcio y la señalización MAPK. En contextos de desarrollo y de patrón tisular, la señalización EDN3–EDNRB se cruza con vías que controlan la proliferación y la diferenciación, incluido el diálogo cruzado con programas dependientes de WNT y de KIT en la biología de las células pigmentarias. La desregulación de la señalización de EDN3 se asocia con trastornos del desarrollo de la cresta neural y de la pigmentación, y se estudia con frecuencia por sus funciones en la inervación gastrointestinal y en la dinámica de señalización del microambiente.

Endothelin-3/EDN3/ET-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EDN3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Endothelin-3/EDN3/ET-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EDN3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EDN3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Endothelin-3/EDN3/ET-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EDN3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Endothelin-3/EDN3/ET-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Endothelin-3/EDN3/ET-3 en células tumorales con expresión de EDN3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.