Plásmido CRISPR de Activación (h) ELL: sc-404799-ACT

ELL humano codifica un factor de elongación de la ARN polimerasa II que aumenta la procesividad de la transcripción y ayuda a coordinar una elongación productiva durante la expresión génica. ELL participa en programas de control transcripcional que influyen en la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas celulares al estrés mediante la regulación de la pausa proximal al promotor y de puntos de control asociados a la elongación. La desregulación de la elongación transcripcional dependiente de ELL se vincula con una expresión alterada de programas de crecimiento y de linaje, y ELL se ha implicado en redes transcripcionales oncogénicas a través de eventos de fusión recurrentes y del reclutamiento aberrante de cofactores. Como resultado, ELL se estudia con frecuencia por su papel en la fidelidad transcripcional, la regulación asociada a la cromatina y la remodelación de la expresión génica relevante para enfermedades.

ELL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ELL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ELL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ELL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ELL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ELL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ELL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ELL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ELL en células tumorales con expresión de ELL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.