eIF4B Double Nickase Plasmid (h): sc-402494-NIC

EIF4B kodiert eIF4B, einen unterstützenden Translationsinitiationsfaktor, der die RNA-Helikaseaktivität von eIF4A verstärkt und bei der cap-abhängigen Initiation die Rekrutierung von Ribosomen an strukturierte mRNAs unterstützt. Über seine Interaktionen mit dem eIF4F‑Komplex und eine regulierende Phosphorylierung nachgeschaltet zu PI3K–AKT–mTOR‑ und MAPK‑Signalwegen trägt eIF4B dazu bei, die Translationsleistung während Wachstum, Stressantworten und Zellzyklusprogression fein abzustimmen. Eine veränderte EIF4B‑Expression oder ein veränderter Aktivierungszustand wurde mit dysregulierten Programmen der Proteinsynthese in Verbindung gebracht, die zu onkogenem Signaling und aberranter zellulärer Proliferation beitragen. Als Knotenpunkt, der Signalwege mit selektiver mRNA‑Translation verknüpft, wird EIF4B häufig im Kontext von Mechanismen untersucht, die Proteostase, Stressgranula‑Dynamik sowie die translationsabhängige Regulation von Apoptose und Stoffwechsel steuern.

eIF4B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF4B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF4B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF4B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF4B-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.