eIF2Bε CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403917-ACT

EIF2B5 は、真核生物翻訳開始因子 2B（eIF2B）の ε サブユニット（eIF2Bε）をコードする。eIF2Bε は、cap 依存的な翻訳開始を維持するために、活性型 eIF2–GTP を再生する触媒的グアニンヌクレオチド交換因子である。eIF2Bε は統合ストレス応答（ISR）の中枢的な結節点であり、eIF2α のリン酸化を全体的な翻訳抑制へと結び付ける一方で、ストレス適応性転写産物の選択的翻訳を可能にする。このようなプロテオスタシスおよびストレス顆粒ダイナミクスの制御を通じて、EIF2B5 は神経細胞およびグリア細胞の恒常性、髄鞘化プログラム、ならびに代謝・酸化ストレスに対する細胞のレジリエンスに影響を及ぼす。eIF2B 複合体機能の病的な破綻は、消失性白質脳症（vanishing white matter leukodystrophy）および関連する eIF2B スペクトラム疾患と関連しており、EIF2B5 はストレス制御下の翻訳機構を解明する研究における重要な標的となっている。

eIF2Bε CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF2B5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF2Bε CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF2B5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF2B5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF2Bεの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF2B5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF2Bε依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF2B5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF2Bε経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。