Plásmido Doble Nickase (h) eIF2A: sc-413527-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)eIF2A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa eIF2A (h) y el plásmido de doble nickasa eIF2A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EIF2A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eIF2A Anticuerpo (3A7A8): sc-517214
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) eIF2A | sc-413527-NIC | 20 µg | $410.00 |
EIF2A codifica eIF2A, un factor no canónico de iniciación de la traducción que puede entregar el Met‑tRNAi iniciador a la subunidad ribosomal 40S de manera independiente del complejo ternario eIF2‑GTP. La actividad de eIF2A es especialmente relevante durante condiciones de estrés celular que atenúan la iniciación canónica, lo que vincula a EIF2A con la reprogramación traduccional y el control de la proteostasis. A través de su función en la regulación de la iniciación específica de ciertos ARNm y de la síntesis proteica adaptativa al estrés, EIF2A se cruza con la respuesta integrada al estrés y con nodos de señalización relacionados que influyen en la supervivencia celular y la homeostasis. El control traduccional desregulado que involucra a EIF2A se ha investigado en contextos como la adaptación al estrés en células tumorales y el estrés proteotóxico asociado a la neurodegeneración, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en estudios de vías.
eIF2A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF2A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.