EHD2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403776-ACT

EHD2（EHドメイン含有タンパク質2）はダイナミン関連ATPアーゼであり、カベオラおよび細胞皮質アクチン細胞骨格と結合して、膜の曲率、エンドサイトーシス輸送、ならびにカベオラの安定性を制御します。カベオラのダイナミクスを制限し、ベシクルの切断やリサイクリングに影響を与えることで、EHD2は細胞接着、遊走、膜張力応答を形作るメカノトランスダクションおよび脂質ハンドリング経路に寄与します。EHD2が関与するカベオラ輸送や細胞骨格とのカップリングの破綻は、細胞の浸潤性やシグナル伝達の区画化の変化を含む、代謝恒常性の異常や腫瘍形成的表現型と関連することが文献で報告されています。そのためEHD2は、ヒト細胞におけるエンドサイトーシス、形質膜の構造・組織化、ならびにカベオラ依存性シグナル伝達を扱う研究で頻繁に検討されています。

EHD2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EHD2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EHD2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EHD2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEHD2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EHD2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEHD2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEHD2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEHD2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEHD2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。