Plásmido CRISPR de Activación (r) EGR1: sc-437290-ACT

EGR1 (respuesta temprana al crecimiento 1) es un factor de transcripción de respuesta inmediata tipo “zinc finger” que acopla rápidamente señales extracelulares con programas de expresión génica en células de rata. Se induce aguas abajo de las vías de señalización MAPK/ERK, PKC y dependientes de calcio, y regula procesos como la proliferación, la diferenciación, la plasticidad sináptica, las respuestas angiogénicas y la adaptación al estrés mediante un control transcripcional específico del contexto. La actividad de EGR1 se integra con redes asociadas a AP-1/NF-κB y puede remodelar la cromatina y los estados transcripcionales tras la estimulación con factores de crecimiento o una lesión. En la literatura, la expresión desregulada de EGR1 se ha vinculado con inflamación, fibrosis, remodelado vascular y programas transcripcionales asociados a tumores, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación génica sensible a estímulos.

EGR1 El plásmido de activación CRISPR (r) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EGR1 El plásmido de activación CRISPR (r) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EGR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EGR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EGR1 en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.